Nanocząstki polistyrenowe i ich właściwości epigenetyczne i genotoksyczne w ludzkich jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej - PRELUDIUM-20 nr 2021/41/N/NZ7/02049 (dataset)

Abstract

W ostatnim etapie projektu zbadano wpływ niefuncjonalizowanych nanocząstek polistyrenu (PS-NP) o średnicach 29, 44 i 72 nm na integralność plazmidowego DNA oraz ekspresję genów zaangażowanych w architekturę chromatyny w ludzkich jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC). Komórki inkubowano z PS-NP w stężeniach od 0,001 do 100 µg/mL przez 24 godziny. Profilowanie ekspresji genów przeprowadzono za pomocą ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym dla następujących genów zaangażowanych w metylację DNA (DNMT1, DNMT3A), demetylację DNA (TET2, TET3) oraz przebudowę chromatyny w tym metylację histonów (EHMT1, EHMT2) i deactylację histonów (HDAC3, HDAC5). Ponadto zbadano ekspresję wybranych markerów epigenetycznych związanych z acetylacją i metylacją histonów (H3ac, H3K4me3, H3K9me3) na poziomie białkowym za pomocą metody Western Blooting.

In the final stage of the project, the effect of non-functionalized polystyrene nanoparticles (PS-NP) with diameters of 29, 44, and 72 nm on plasmid DNA integrity and the expression of genes involved in the architecture of chromatin was investigated in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The cells were incubated with PS-NPs at concentrations ranging from 0.001 to 100 µg/mL for 24 hours. Gene expression was carried out using quantitative real-time PCR for the following genes those involved in DNA methylation (DNMT1, DNMT3A), DNA demethylation (TET2, TET3), and chromatin remodeling including histone methylation (EHMT1, EHMT2) and histone deacetylation (HDAC3, HDAC5). Furthermore, the expression of selected epigenetic markers related to histone acetylation and methylation (H3ac, H3K4me3, H3K9me3) at the protein level was examined using Western blotting.