Interaction between organophosphorus compounds and DNA assayed by the restriction endonuclease EcoRI
Streszczenie
Enzymy restrykcyjne ze względu na istotę swojego działania mogą być źródłem informacji
na temat miejsca lub specyficzności sekwencyjnej wiązania substancji do DNA. Z drugiej
strony, działanie enzymów może być zaburzone przez związki mające zdolność do metylacji
zasad DNA. Cecha ta może być wykorzystywana do pierwotnej selekcji związków potencjalnie
genotoksycznych. W pracy badano działanie enzymu restrykcyjnego £coRI na DNA, które
było uprzednio inkubowane ze związkami fosforoorganicznymi. DNA plazmidu pUC19
0 stężeniu 78 μg/ml był inkubowany przez 72 h z insektycydami fosforoorganicznymi
parationem i metyloparationem oraz z ich głównymi metabolitami, odpowiednio paraoksonem
1 metyloparaoksonem o stężeniu 300 μM. Po inkubacji nie związane insektycydy były usuwane
przez ultrafiltrację, a DNA poddawano 1 h inkubacji z endonukleazą restrykcyjną EcoRI
i analizowano przez elektroforezę w 0.8% żelu agarozowym. Związek fosforoorganiczny
metyloparaokson powodowa! rozwinięcie superskręconego DNA plazmidu pUC19, a działanie
EcoRI na ten DNA było zaburzone, co znalazło swe odbicie w zmienionym obrazie elektroforetycznym.